ساخت ناقل لنتی ویروسی بر پایه ویروس HIV-1 با کاربری انتقال ژن به سلول¬های تقسیم شونده و غیر تقسیم شونده
چکیده
مقدمه: روش های زیستی انتقال ژن یا استفاده از ناقلهای ویروسی، کاربرد گسترده ای در اهداف درمانی دارد. استفاده از ناقل های لنتی ویروسی با داشتن مزایایی چون توانایی آلودهسازی سلولهای تقسیم شونده و غیر تقسیم شونده، توان حمل قطعه ی ژنی بزرگ و بیان پایدار ژن خارجی، ابزاری مناسب برای انتقال ژن در کاربردهای تحقیقاتی و درمانی به شمار می آیند. هدف از این پژوهش تولید یک ناقل لنتی ویروسی بر مبنای HIV-1(Human Immunodeficiency virus) با پوششی از ویروس وزیکولار استوماتیس(vesicular stomatitis virus glycoprotein-G: VSVG) بود. این ناقل می تواند به عنوان وسیله ای برای انتقال ژن به سلولهای تقسیم شونده و غیر تقسیم شونده، در انواع مطالعات تحقیقاتی و درمانی، مورد استفاده قرار بگیرد.
مواد وروش ها: روش کلسیم فسفات برای ترنسفکشن همزمان سه پلاسمید شامل پلاسمید بیان کننده ژن خارجی به همراه گزارشگر بیانی(pWPXL-GFP)، پلاسمید بیان کننده پروتئینهای gag و pol(psPAX2) و پلاسمید بیان کننده گلیکوپروتئین پوشش(pMD2.G)، بر روی رده سلولی کلیه جنین انسان، انجام گرفت. تایید ترانسفکشن با استفاده از فلوسیتومتری انجام گرفت و پس از تغلیظ ویروس ها، ترانسداکشن بر رده سلولی هدف انجام شد.
یافته ها: نتایج فلوسیتومتری بیان 37/ 51 درصد از ژن گزارشگر پروتئین سبز فلورسانت(Green Fluorescent Protein:GFP) را در سلولهای ترانسفکت شده نشان داد. پس از تغلیظ ویروس و انجام ترانسداکشن؛ دخول پروویروس به ژنوم سلول هدف و بیان طولانی مدت GFP در این سلولها با مشاهده به وسیله میکروسکوپ فلورسانت، 15روز پس از ترانسداکشن ارزیابی شد و نتایج مثبت گزارش شد.
نتیجه گیری: بیان ژن گزارشگر در سلول ها،پس از ترانسداکشن، صحت ورود ناقل ویروسی را به سلول ها نشان داد و به این ترتیب ناقل تولید شده در این پژوهش علاوه بر کارایی انتقال ژن به دلیل ماهیت لنتی ویروسی آن، توانایی انتقال ژن به سلولهای غیر تقسیم شونده را نیز علاوه بر سلول های تقسیم شونده دارا میباشدکه موجب کاربرد گستره تر آن، نسبت به سایر ناقل های ویروسی، در مطالعات انتقال ژن میشود.
كليد واژه ها: انتقال ژن ، ناقل لنتی ویروسی، ترانسفکشن، کلسیم فسفات ، ترانسداکشنموارد حقوقی تعهدات نویسنده مسؤول مقاله و سایر نویسندگان ـ پذیرش مسؤولیت محتوای مقاله و توان دفاع از آن در مجامع علمی ـ تفویض حق چاپ به مجله ـ پاسخگویی به هرگونه ادعای حقوقی در مورد حق مؤلف یا محتوا ـ عدم ارسال مقاله به مجله فارسی زبان دیگر تا اعلام نظر نهایی شورای نویسندگان )حداکثر 3 ماه پس از اعلام وصول مقاله به دفتر مجله) ـ ذكر منابع مالي و اعتباري طرح پژوهشي در صفحه عنوان مقاله ضروري است. ـ حق نشر و نمایهسازی از مقالات چاپ شده یا در حال بررسی در مجله، منوط به کسب اجازه از دفتر مجله میباشد. ـ چاپ کامل مقالهای که قبلاً به صورت سخنرانی یا پوستر در همایشها ارائه و بطور خلاصه منتشر شده است، در مجله با ذکر محل و نوع ارائه قبلی بلامانع است. ـ مقالات چاپ شده در مجله برای ارائه به همایشها نیازمند مجوز دفتر مجله میباشد. ـ چاپ هر مقاله منوط به رعایت معیارهای اخلاقی در هر یک از بخشهای مجله میباشند. ـ نویسنـدگان مقاله در قبال کسانی که از آنها در بخش قـدردانی با ذکر نام تشکر میکنند، مسؤولیت پاسخگویی دارند. ـ مجله مسؤولیتی در قبال دعاوی بین نویسندگان و نیز نویسندگان با مراجع دیگر را برعهده نخواهد داشت. ـ مجله در قبول يا رد مقالات آزاد است و نيز حق ويرايش علمي و ادبي و تخليص مقالات را براي خود محفوظ ميدارد. نسخه نهايي قبل از چاپ به رؤيت نوسينده مقاله خواهد رسيد. ـ مجله متعهد است با توجه به پاسخگویی نویسنده به اشکالات و سؤالات مطرح شده در مدت معین، ظرف 3 ماه از زمان اعلام وصول مقاله به دفتر مجله، در مورد پذیرش یا رد آن اعلام نظر نماید.